维甲酸对小型猪牙周膜干细胞成骨诱导能力的比较研究

摘要

目的分离、培养、鉴定小型猪牙周膜干细胞(PDLSCs)并使用不同浓度的维甲酸(RA)对其进行成骨方向诱导,观察各浓度RA诱导后小型猪PDLSCs的碱性磷酸酶活性、相关成骨基因表达的差异。方法采用组织块法获得小型猪PDLCs,有限稀释法纯化小型猪PDLSCs,免疫荧光法检测STRO-1、免疫细胞化学法检测波形蛋白、角蛋白鉴定小型猪PDLSCs。分别使用0.5μm、1μm、2μm RA对小型猪PDLSCs进行成骨诱导,14 d后行ALP染色,诱导21 d后,茜素红染色检测矿化结节。诱导14 d后对比各组细胞ALP活性。Real-time PCR定量分析各组RA诱导小型猪PDLSCs第21天ALP、OPN、OCN、Col I基因表达情况。结果纯化后小型猪PDLSCs STRO-1,波形蛋白阳性表达,角蛋白阴性表达,各组RA诱导14 d后,ALP染色阳性,诱导21 d后各诱导组细胞茜素红染色阳性。ALP活性检测显示,小型猪PDLSCs诱导至第14天,ALP活性随RA浓度增高而增高(P<0.001)。Real-time PCR分析成骨相关基因表达结果显示,ALP、OCN基因表达与RA浓度呈剂量依赖关系。结论0.5μm、1μm、2μm三种浓度的RA均可诱导小型猪PDLSCs分化为成骨样细胞,并且其成骨诱导的能力在一定范围内随着RA浓度增高而增强,可以认为RA可能是一种更优秀的成骨诱导剂。