利用CRISPR/Cas9建立RBBP4低表达的HepG2,LO2稳定细胞系

摘要

目的利用CRISPR/Cas9在肝癌细胞HepG2及正常肝组织细胞(LO2)中敲低RBBP4 eGFP报告基因,构建RBBP4低表达的HepG2及LO2稳定细胞系.方法基于CRISPR/Cas9系统原理,设计靶向细胞RBBP4基因第1个外显子的小向导RNA(sgRNA),构建具有左右同源臂和P2A-eGFP供体质粒的干扰质粒;将测序鉴定正确的重组质粒分别转染至HepG2及LO2细胞中,通过嘌呤霉素筛选细胞系,提取RNA和蛋白,分别通过QPCR和蛋白质印迹分析检测RBBP4敲低对细胞系的影响.结果QPCR及和蛋白质印迹分析结果提示筛选的HepG2及LO2细胞系中RBBP4基因及蛋白表达减低(P<0.05).结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了RBBP4稳定敲低的HepG2及LO2细胞系.