PKC介导的elavl1磷酸化在斑马鱼心脏发育中的调控作用

摘要

目的探讨蛋白激酶C(PKC)介导的RNA结合蛋白elavl1(embryonic lethal abnormal vision like 1)磷酸化通过稳定转录因子nkx2.5 mRNA从而调控斑马鱼的心脏发育.方法应用寡核苷酸技术敲降斑马鱼内源性elavl1a的表达,收集出生后24 h的胚胎并裂解蛋白,Western Blot验证elavl1a的表达;应用抑制剂阻断PKC的活性或敲降elavl1的表达,收集出生后48 h的胚胎并固定.运用整体胚胎原位杂交技术观察斑马鱼心脏发育;实时荧光定量PCR验证基因表达.结果阻断PKC活性或敲降斑马鱼elavl1的表达后斑马鱼胚胎心脏发育出现心腔积水;斑马鱼胚胎中高表达elavl1上丝氨酸Ser219和Ser316(PKC磷酸化位点)突变mRNA会导致心腔积水;生物信息学分析发现斑马鱼nkx2.53'UTR含有elavl1的三个潜在结合位点,实时荧光定量PCR结果显示敲降elavl1a的表达会导致nkx2.5的mRNA显著下调.结论PKC可能是通过elavl1a Ser219和Ser316磷酸化调控nkx2.5 mRNA的稳定性从而影响斑马鱼早期心脏的发育.