马疱疹病毒1型ORF30基因的克隆及原核表达

摘要

近些年来,马疱疹病毒性脑脊髓病的出现频率越来越高,对养马业和赛马业的危害很大.国外许多研究表明,该病神经症状的出现与该病毒编码DNA聚合酶催化亚基的ORF30基因单核苷酸点变异之间具有显著性关联.为获得大量EHV-1病毒DNA聚合酶并进一步研究ORF30基因SNP对DNA聚合酶活性和功能的影响研究奠定基础,本研究以EHV-1-XJ2015毒株基因组DNA为模板,扩增ORF30基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得原核表达质粒pET-32a-ORF30,并转化宿主菌E.coli BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白分子量约为39kDa,Western blot检测证明ORF30编码的蛋白能与EHV-1阳性血清产生特异性免疫反应,具有较强的反应原性.通过原核表达获得的DNA聚合酶具有较好的抗原性和特异性.