氧化槐定碱体内体外通过AKT/mTOR通路调控自噬抑制HBV诱发肝纤维化

摘要

目的观察氧化槐定碱抑制HBV诱发肝纤维化的机制。方法采用细胞间非接触式的共培养体系进行培养,同时建立HBV诱发肝纤维化的动物模型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测LX-2细胞抑制率,qRT-PCR法检测α-SMA、collagenⅠmRNA水平,Western blot检测细胞纤维化、自噬、AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平,运用AKT-siRNA、雷帕霉素、自噬抑制剂(3-MA)探讨自噬对肝纤维化的影响。结果体外实验显示:0.5-32 mg·L^(-1)氧化槐定碱抑制LX-2细胞的增殖(P<0.05);与对照组比较,氧化槐定碱4、8、16、32 mg·L^(-1)组α-SMA、collagenⅠmRNA表达水平降低,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平上调,p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平下调(P<0.05);与氧化槐定碱16 mg·L^(-1)组比较,氧化槐定碱16 mg·L^(-1)+AKT-siRNA组抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显增加,p-AKT/AKT、collagenⅠ明显降低(P<0.05);与氧化槐定碱16 mg·L^(-1)组比较,氧化槐定碱16 mg·L^(-1)+3-MA组抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显降低,p-AKT/AKT、collagenⅠ明显增加(P<0.05)。体内实验显示:与氧化槐定碱组比较,氧化槐定碱+雷帕霉素组ALT、AST、collagenⅠ、p-mTOR/mTOR水平明显下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平明显上调;氧化槐定碱+3-MA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平明显下调,collagenⅠ、p-mTOR/mTOR明显上调(均P<0.05)。结论氧化槐定碱能调控肝细胞自噬,上调细胞纤维化水平,其机制可能与调控AKT/mTOR信号通路有关。