冰片促灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障的作用研究

摘要

目的 观察不同比例冰片对灯盏乙素在体外血-视网膜内屏障的促透作用。方法 完成高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)检测灯盏乙素药物浓度的方法学开发和验证;体外培养大鼠视网膜血管内皮细胞,并用Transwell建立视网膜内皮细胞屏障模型;在体外血-视网膜内屏障模型的上室中给予含有不同比例冰片的灯盏溶液,分时段提取透屏障后的HBSS液,采用HPLC-MS/MS检测透屏障的下室HBSS液中灯盏乙素浓度。结果 (1)自建HPLC-MS/MS检测灯盏乙素的方法特异性好,准确度、灵敏度高,各项方法学验证均符合2015版《中国药典》第四部中《9012生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求。(2)建立体外血-视网膜内屏障模型成功,在体外内皮细胞屏障模型中,上室灯盏乙素浓度为100μg·mL^(-1),在2 h后,上室中未添加冰片的下室灯盏乙素药物透过浓度为8.82μg·mL^(-1),上室添加冰片分别为60μg·mL^(-1)、120μg·mL^(-1)、240μg·mL^(-1)、480μg·mL^(-1)的下室中的灯盏乙素药物浓度分别为9.50μg·mL^(-1)、9.57μg·mL^(-1)、11.30μg·mL^(-1)、12μg·mL^(-1)。在冰片浓度为480μg·mL^(-1)时,下室中灯盏乙素的能达到最大浓度为12μg·mL^(-1)。结论 (1)灯盏乙素在HBSS中的含量检测方法学验证成功;(2)冰片可能具备促进灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障模型的作用;(3)在上室的冰片药物浓度达到480μg·mL^(-1)时,本研究灯盏乙素透过体外血-视网膜内屏障模型达到最大药物浓度。