硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立

摘要

对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究.结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA.较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响.通过A2s0/A280,琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30～50 ng DNA模板,0.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH 8.0),反应终体积20uL,引物最佳退火温度为54～57C.利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200～600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好.