仙茅根茎DNA的提取及其ISSR-PCR反应体系的优化

摘要

为了改进仙茅基因组DNA的提取方法,从而为其遗传多样性研究提供参考依据,以仙茅根茎为材料,采用CTAB法探讨了仙茅根茎DNA大量提取中CTAB浓度、PVP用量及NaCl浓度对其DNA质量的影响情况.结果表明,仙茅根茎DNA的大量提取方法的最优组合为:CTAB的浓度为2％,PVP的加入量为0.20 g,NaCl的浓度为4 mol/L.为了得到仙茅的最佳ISSR-PCR反应体系,以(CT)8RG为引物,采用单因素实验与正交实验相结合的方法,得到的最优反应体系(25 μL)为:1×PCR Buffer,模板DNA浓度为50 ng,Mg2+浓度为2.50 mmol/L,dNTPs浓度为0.20 mmol/L,引物浓度为0.40 μmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为1.50 U.