变形链球菌表面蛋白真核表达载体pcDNA3-PAc的构建——Ⅱ.玻璃纤维质粒分离纯化层析柱重复利用有效性的验证

摘要

目的:寻找一种成本较低又可获得较高纯度质粒DNA的方法。方法:根据玻璃纤维质粒纯化层析柱分离纯化核酸的原理,对其使用方法进行改进。使一次性使用的玻璃纤维层析柱能够重复使用。利用分光光度法测定12次重复使用获得的质粒DNA浓度和纯度。进一步利用酶切实验、体外连接和转化实验对重复使用玻璃纤维层析柱获取的质粒DNA进行检测。结果:重复使用玻璃纤维层析柱12次获得的质粒DNA在浓度和纯度上均无明显差异(P>0.05),并且均能被内切酶充分酶切,重新连接后能够很好地被转化。结论:重复使用玻璃纤维层析柱分离纯化质粒DNA的方法能制备出大量高纯度的质粒DNA,不影响质粒的酶切、体外连接和转化,大大降低了成本。