牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1的研究

摘要

目的 探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)刺激的巨噬细胞中髓样细胞触发受体-1(TREM-1)、可溶性TREM-1(sTREM-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,探讨TREM-1与牙周炎发病机制的可能关联.方法使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系细胞THP-1分化为巨噬细胞,分别予以0(空白对照)、0.5、1.0μg·mL-1的Pg-LPS刺激,并根据不同时间分组:孵育4、6、12、24 h组.实时定量聚合酶链反应检测巨噬细胞中TREM-1 mRNA的表达,Western blot分析TREM-1蛋白表达的差异,细胞免疫荧光染色检测TREM-1在巨噬细胞中的表达部位,并通过酶联免疫吸附试验对细胞培养液中的sTREM-1及TNF-α进行检测.结果与空白对照组相比,Pg-LPS刺激巨噬细胞后TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达均显著增强(P<0.05);1.0μg·mL-1 Pg-LPS组TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达量高于0.5μg·mL-1组,且分别从6、4、4 h时间点开始差异具有统计学意义(P<0.05);细胞免疫荧光染色结果显示,Pg-LPS(1.0μg·mL-1)刺激巨噬细胞24 h后,可见TREM-1蛋白呈阳性染色,且TREM-1的染色部位主要位于巨噬细胞的细胞膜区域;Pg-LPS刺激巨噬细胞后TNF-α的分泌水平升高(P<0.05),其中1.0μg·mL-1 Pg-LPS组表达量高于0.5μg·mL-1组,且从12 h开始差异具有统计学意义(P<0.05);0.5μg·mL-1 Pg-LPS刺激巨噬细胞后TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白、sTREM-1间表达呈正相关(r=1,P<0.05),但与TNF-α表达不存在相关性;在1.0μg·mL-1 Pg-LPS刺激巨噬细胞后检测到了具有统计学意义的sTREM-1与TNF-α表达的正相关性(r=1,P<0.05).结论巨噬细胞受到Pg-LPS刺激后可出现Pg-LPS浓度依赖性的TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达上调,且能观测到三者之间表达的正相关性;同时细胞培养上清液中的TNF-α也出现Pg-LPS浓度依赖性的表达上调,在高浓度Pg-LPS(1.0μg·mL-1)刺激下与sTREM-1表达量呈正相关.该结果提示,TREM-1作为促炎受体蛋白,可能通过调节巨噬细胞TNF-α的表达来实现牙周炎发展的促进作用.