罗氏沼虾白斑综合症病毒WSSV ORF147片段的克隆、表达与序列分析

摘要

白斑综合症病毒WSSV（White Spot Syndrome Virus），是严重危害虾类养殖业的主要病原之一。本实验根据已知南美白对虾WSSV ORF147序列设计1对特异性引物，从患疑似白斑病毒病的罗氏沼虾中提取总DNA，用PCR法扩增得到1特异性片段。将该片段克隆进pET-28a（＋）载体，测序表明该片段全长1475bp．最大开放式阅读框为1380bp，编码459个氨基酸，预计其相对分子质量为51．9kDa；与GenBank登录的WSSV ORF147序列（登录号AF369029）进行比对，核苷酸同源性为99％，证实为WSSV ORF147片段。将该片段在大肠杆菌Ecoli中进行表达，能获得相应的特异多肽条带。根据测序结果推导WSSV ORF147多肽在N端有信号肽序列，并且在氨基酸序列的122～144区间形成跨膜螺旋区。