内质网应激时重组腺病毒Ad-PERK siRNA对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的 :探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA（small interfering RNA,si RNA）重组腺病毒在内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）时对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向PERK基因的si RNA重组腺病毒Ad-PERK si RNA,并将其感染SW1353细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达。应用衣霉素（tunicamycin,TM）建立ERS模型;在ERS状态下,MTT法检测Ad-PERK si RNA感染后SW1353细胞的增殖情况,FCM法检测感染后SW1353细胞的细胞周期和细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察感染后SW1353细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测感染后SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP）和磷酸化c-Jun氨基端激酶（phospho-c-Jun-N-terminal kinase,p-JNK）蛋白的表达。结果 :成功构建获得重组腺病毒AdPERK si RNA。Ad-PERK si RNA感染后,SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达水平下调（P＜0.05）。在ERS状态下,Ad-PERK si RNA可促进SW1353细胞的增殖（P＜0.05）,Ad-PERK si RNA感染组S期细胞所占比例高于感染空载体腺病毒Ad-RFP的阴性对照组和未感染的空白对照组（P＜0.05）,Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞的凋亡率低于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）,透射电子显微镜下观察发现阴性对照组和空白对照组SW1353细胞存在明显的凋亡,Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CHOP和p-JNK蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组（P＜0.05）。结论 :重组腺病毒Ad-PERK si RNA可以促进ERS状态下SW1353细胞的增殖,并抑制其凋亡。