葛根总皂苷调控NAMPT-Sirt1轴诱导BMSCs向髓核样细胞分化

摘要

目的 研究葛根总皂苷(TSPL)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及其作用机制.方法 体外建立大鼠腰椎间盘退变模型,分为假手术组、模型组、30 mg/kg TSPL治疗组和50 mg/kg TSPL治疗组.原代培养的BMSCs分为BMSCs组,BMSCs-TSPL(10、20、30、40、50μmol/L)组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-FK866[烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)特异性抑制剂,2.5μmol/L]组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-SRT2104(Sirt1激活剂,10μmol/L)组.二甲基亚甲基蓝比色法检测细胞和组织中糖胺聚糖含量,qPCR和Western blot检测髓核样细胞COL2A1、Aggrecan、Sox9、Tie2以及Sirt1的mRNA和蛋白表达量.WST-8法检测细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腺苷三磷酸(ATP)和NAMPT水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠椎间盘L5～S1组织中糖胺聚糖含量减少(P<0.05);与模型组相比,TSPL治疗组大鼠糖胺聚糖含量增加,且50 mg/kg TSPL效果优于30 mg/kg TSPL(P<0.05);与BMSCs组相比,TSPL单独或联合SRT2104处理增加BMSCs中糖胺聚糖、COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及NAD+、ATP和NAMPT含量,而降低Tie2的mRNA和蛋白表达量(P<0.05);与BMSCs-TSPL组相比,BMSCs-TSPL-FK866组COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及糖胺聚糖、NAD+、ATP和NAMPT含量降低,而BMSCs-TSPL-SRT2104组上述指标水平增加(P<0.05).结论 TSPL可通过NAMPT-Sirt1轴诱导大鼠BMSCs向髓核样细胞分化.