一种改进的从细菌人工染色体中亚克隆DNA片段的方法

摘要

目的 运用基于PCR的重叠区延伸法构建缺口修复载体,通过同源重组的方式从细菌人工染色体(BACs)中亚克隆DNA片段.方法 用基于PCR的重叠区延伸法将线性化质粒骨架分子、较长的上游和下游同源臂(200～500bp)串联起来构建成缺口修复载体.将此载体电击转入含有BAC的EL350菌中,经热激诱导Red重组酶瞬时表达,使缺口修复载体与BAC发生同源重组.结果 重叠区延伸法构建的两个缺口修复载体分别成功地从BAC中亚克隆得到目的DNA片断.结论 该方法省去了酶切、连接、转化等繁琐的克隆步骤,大大缩短了实验周期,提高了实验效率,为基因组BAC测序过程中的缺口封闭及复杂的打靶载体构建提供了较为便捷的方法.