硫堇块染色法显示神经元尼氏体的体会

摘要

尼氏体也常被称为嗜染质,主要成分是核糖核酸(RNA)和蛋白质,易被碱性苯胺染料所染,硫堇就是最常用的一种,但缺点是易褪色,给大量回顾性研究及教学都带来许多不便.为了解决这一问题,本实验用硫堇块染色法,经多次实验可免去脱水过程,使标本不易脱色,而且结果也很理想,适合制作大量的教学切片,制作简便,方法简单,而且可长期保存不易脱色.具体步骤介绍如下:选用猫脊髓、鼠大脑组织厚2mm,入4%多聚甲醛(0.1molPB 配制 pH7.4)固定液内固定一周.0.01molPBS(pH7.4)洗三次,各取3块脊髓、大脑组织块分别放入0.2%、0.5%、1%、2%、4%的硫堇水溶液内 ,50℃温箱内染色,分别于3d、5d、10d取出,入95%酒精脱色30min,入 100%酒精2次各1hr,二甲苯透明15min,入软蜡2hr,入硬蜡2hr,硬蜡包埋.切片5μm,展片后,二甲苯脱腊,中性树胶封片.结果:猫脊髓前角神经元胞质内的尼氏体及核仁清晰可见,呈紫蓝色.大脑皮质锥体细胞,海马齿状回锥体细胞及颗粒细胞胞质均呈紫蓝色.体会:1.几组实验结果对比发现用2%的硫堇水溶液浸泡5d,效果最好.2.脱水时间必须短,可直接入95%酒精脱水,分色.3.脊髓切片5μm,大脑切片 6μm实验结果最理想.4.此方法的优点是制作简便,石蜡切片后不需再染色,直接二甲苯脱蜡封片,所以同时也解决了脱水不干净,产生褪色的问题.