失荅剌知丸及其拆方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马区细胞外信号调节蛋白激酶5通路的影响

摘要

目的 探讨失荅剌知丸及其拆方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠治疗中的作用机制及其可能的有效配伍成分.方法 将204只SPF级SD雄性大鼠按随机数字表法随机分为空白对照组(A组),假手术组(B组),模型组(C组),失荅剌知丸组(D组),巴豆组(E组),巴豆+三药组(F组),巴豆+余药组(G组),其中后5组制备局灶性脑缺血再灌注模型,并按取材时间点不同分为1 d、3 d、7 d组.各组大鼠取材前应用Garcia JH法进行神经功能评分.应用HE染色法观察大鼠各时间点脑组织病理学形态改变;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白质印迹法检测观察丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节蛋白激酶(MAPK-ERK)信号通路中ERK5的蛋白表达水平.结果 与空白对照组及假手术组相比,各组神经功能评分评分均减低、p-ERK5活化程度均升高、ERK5的mRNA相对表达含量明显升高(P<0.01);与模型组相比,各药物组神经功能评分均增加、p-ERK5活化程度均升高、ERK5mRNA相对表达含量均升高(P<0.05或P<0.01);各药物组中,失荅剌知丸组神经功能评分、p-ERK5活化程度及ERK5的mRNA相对表达含量高于各拆方组,各拆方组中以巴豆+三药组神经功能评分、p-ERK5活化程度及ERK5的mRNA相对表达含量最高(P<0.05或P<0.01);模型组及各药物组神经功能评分、p-ERK5活化程度、ERK5的mRNA相对表达含量随时间延长而增加.HE染色结果现示模型组大鼠海马CA1区神经细胞较空白对照组及假手术组排列松散、紊乱、模糊,胞核与胞质界限欠清晰;与模型组相比,各药物组神经细胞形态改善明显;各药物组中以失荅剌知丸组改善效果最明显;各拆方组中以巴豆+三药组神经细胞形态改善较为明显.结论 失荅剌知丸及各拆方组均可改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能损伤,抑制神经细胞凋亡,这可能与其参与调节MAPK-ERK通路中ERK5的表达相关;各拆方组中以巴豆、柴胡、黑诃子、芦荟四味药物的组方治疗效果最佳,考虑该组药物可能是失荅剌知丸能有效抑制局灶性脑缺血再灌注损伤的主要药物组成;巴豆可能是四味药中发挥脑保护作用的主要药物之一.