重组大鼠pEGFP-N1-IGF-1基因表达质粒的构建

摘要

目的 构建胰岛素样生长因子-1基因的真核表达质粒(pEGFP-N1-IGF-1),为基因治疗脊髓损伤(SCI)提供前提.方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从大鼠肝脏组织总RNA中提取并扩增胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因的全长cDNA,并将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,以构建重组质粒pEGFP-N1-IGF-1.结果 实验从大鼠肝脏组织中提取总RNA,以RT-PCR方法获取编码IGF-1基因的全序列cDNA.构建IGF-1 cDNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF-1基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果.结论 构建重组质粒pEGFP-N1-IGF-1成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF-1基因的3′端,并以编码柔软肽段的核苷酸连接,既保留了IGF-1的神经营养活性,又便于基因治疗中可检测到蛋白表达.