α7烟碱型受体兴奋剂、拮抗剂对胆管癌细胞侵袭能力的影响及机制

摘要

目的 观察α7烟碱型受体兴奋剂尼古丁、拮抗剂银环蛇毒素(α-BTX)对胆管癌细胞侵袭能力的影响,并探讨机制.方法 取对数期胆管癌细胞,去血清培养12 h,取200μL浓度分别为0.5 ×105、1.0×105、1.5×105、2.0×105/mL的胆管癌细胞加入Transwell上室,下室加入10％血清的RPMI1640培养液600 μL,于12、24、36、48 h观察侵袭细胞数.结果随细胞浓度及作用时间的增加,侵袭细胞数逐渐增加,但当浓度超过1.5×105/mL,时间超过36 h后,侵袭细胞数增长缓慢,据此筛选出1.5×105/mL细胞浓度、作用时间36 h用于后续实验.①取1.0×105/mL的胆管癌细胞加入Transwell上室,分为实验1、2、3、4组,分别加入尼古丁0、1×10-2、1×10-3、1×10-4g/L,培养36 h后0.1％结晶紫染色并于倒置显微镜下计数侵袭细胞数.②取1.0×105/mL的胆管癌细胞加入Transwell上室,分为实验1、2、3、4组,分别加入尼古丁0、1×10-2、1×10-2、1×10-2 g/L,α-BTX分别为2、2、4、6μg/mL,培养36 h后0.1％结晶紫染色并于倒置显微镜下计数侵袭细胞数.结果 单纯尼古丁作用后穿过基质胶的细胞数增多,实验1、2、3、4组细胞侵袭数分别为(17.90±1.70)、(25.56±1.02)、(26.03±1.32)、(23.22±1.24)个,实验1组与后三组比较,P均＜0.05;尼古丁联合α-BTX共同作用后穿过基质胶的细胞数减少,实验1、2、3、4组细胞侵袭数分别为(16.89±1.27)、(18.16±0.89)、(18.20±1.46)、(18.15±2.01)个,实验1组与后三组比较,P均＜0.05.结论 尼古丁可明显增强胆管癌细胞的侵袭能力,α-BTX可明显抵消尼古丁所产生的促侵袭能力,其机制可能通过改变α7烟碱型受体活性而发挥作用.