敲低m6A甲基转移酶WTAP对皮肤鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

摘要

目的通过敲低N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在皮肤鳞癌(cSCC)细胞中的表达,探讨WTAP对cSCC细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响。方法选取人cSCC细胞A431、SCL-1及正常人表皮角质形成细胞HaCaT,Western blotting法及qRT-PCR法分别检测各细胞中WTAP蛋白及mRNA表达。选取WTAP蛋白及mRNA表达最高的A431细胞转染WTAP敲低慢病毒shWTAP-1、shWTAP-2、shWTAP-3及阴性对照慢病毒shNC,使用qRT-PCR与Western blotting验证转染效率。选取敲低差异最显著的shWTAP-3转染细胞作为WTAP敲低组,shNC转染细胞作为对照组。采用比色法检测细胞m6A表达,CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果WTAP敲低组m6A表达低于对照组,各时点细胞OD值均低于对照组,克隆形成数少于对照组,穿膜细胞数、细胞迁移率低于对照组(P均<0.05)。结论敲低WTAP可抑制cSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,该作用可能通过下调m6A表达来实现。