失笑散“异病同治”原发性痛经和慢性萎缩性胃炎的作用机制预测及动物试验验证

摘要

目的了解失笑散治疗原发性痛经(PD)和慢性萎缩性胃炎(CAG)“异病同治”的作用机制。方法采用TCMSP、BATMAN-TCM数据库筛选失笑散有效活性成分及作用靶点,采用Gene Card、Drung Bank、OMIM数据库获取PD和CAG相关蛋白,并取药物、疾病交集靶点制作韦恩图获取失笑散作用靶点与PD、CAG疾病靶点的交集靶点。采用Cytoscape3.9.1软件制作失笑散治疗PD和CAG的成分—靶标网络图,通过String平台构建药物—疾病靶蛋白PPI网络,获取失笑散治疗PD和CAG的核心活性成分、核心靶点。利用DAVID数据库对核心靶点进行GO、KEGG通路富集分析。然后取核心活性成分和核心靶点,通过Autodock Vina软件进行分子对接。大鼠随机分为失笑散低、中、高剂量组(2.5 g/kg,5 g/kg,10 g/kg)、模型组、阳性对照组(布洛芬20 mg/kg)及阴性对照组。除外阴性对照组,其余各组均建立PD动物模型;造模过程中从第4天失笑散低、中、高剂量组灌胃对应治疗剂量的失笑散,阳性对照组灌胃布洛芬20 mg/kg,对照组灌胃等量生理盐水,每天1次。除对照组外,其余各组大鼠腹腔注射缩宫素1.0 m L/kg,对照组皮下注射生理盐水。用药前及末次用药后1 h记录大鼠扭体反应次数,测算子宫收缩抑制率和子宫指数,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、IL-1;第12天处死大鼠取子宫组织,采用ELISA法检测VEGFA、PTGS2。结果筛选到失笑散药物有效活性成分15个,失笑散-PD-CAG交集靶点共35个。槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、花生四烯酸、异鼠李素等可能是失笑散治疗PD和CAG的核心有效成分,IL-6、TNF、TP53、VEGFA等可能是失笑散治疗PD和CAG的核心靶点。共获得442条GO生物过程和121条相关信号通路,其中TNF、IL-17等信号通路与失笑散对PD和CAG起治疗作用密切相关。β-谷甾醇、槲皮素等核心有效成分与TP53、TNF、VEGFA等核心靶点对接结果良好。失笑散可降低原发性痛经大鼠子宫指数、扭体次数,升高子宫收缩抑制率(P均<0.05);抑制血清中TNF-α、IL-6、IL-1及子宫组织中PTGS2、VEGFA蛋白的表达,以中高剂量组为著(P均<0.05)。结论失笑散可能通过槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇等活性成分与TNF、IL-6、TP53、VEGFA、IL-1β等主要靶点蛋白结合,抑制IL-17、TNF等炎症信号通路治疗PD及CAG,失笑散的用药剂量以5 g/kg、10 g/kg为佳。