乙型肝炎病毒X蛋白调节TRAIL诱导的肝细胞凋亡

摘要

观察乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF—related apoptosis—inducing ligand,TRAIL）诱导肝细胞凋亡的影响并初步探讨其分子机制.构建包含HBx 基因的真核表达载体pcDNA-HBx,转染BEL7402肝癌细胞,建立可稳定表达HBx的肝癌细胞系BEL7402-HBx,同时设立空载体pcDNA3转染对照组细胞BEL7402-cDNA3.台盼蓝染色计数, Caspase3活性检测和TUNEL法检测TRAIL诱导BEL7402,BEL7402-cDNA3,BEL7402-HBx细胞凋亡的情况,并通过流式细胞术分析3组细胞表面TRAIL受体的表达水平.此外,利用硫代反义寡核苷酸封闭HBV全基因转染肝癌细胞系HepG2.2.15中HBx蛋白的表达,观察阻断前后对TRAIL诱导凋亡敏感性的改变,进一步反向验证HBx对TRAIL诱导凋亡的调节作用.台盼蓝染色计数提示TRAIL对BEL7402,BEL7402-cDNA3,BEL7402-HBx均有剂量依赖性的细胞毒作用,但在相同浓度TRAIL作用下,BEL7402-HBx细胞较BEL7402,BEL7402-cDNA3细胞有更高的敏感性.Caspase3活性检测结果分析发现,TRAIL作用后BEL7402-HBx细胞在较短时间内有更高的Caspase3活化水平.TUNEL结果显示,10μg/LTRAIL作用下,BEL7402-HBx细胞凋亡率可达（41.4±7.2）%,显著高于对照组细胞.反义封闭HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达可部分阻断TRAIL诱导的凋亡.两?