'红肉脐橙'八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达

摘要

[目的]克隆、分析'红肉脐橙'(Citrus sinensis Osbeck cv.Cara Cara)八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)基因,并进行原核表达.[方法]以'红肉脐橙'果实中分离的mRNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段,并分析其序列;利用PCR技术获得'红肉脐橙'PSY cDNA的编码区全长,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+),获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达.[结果]'红肉脐橙,PSY cDNA长1 520 bp,最大开放读码框为1 308 bp,可编码436个氨基酸,核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上,并且发现'红肉脐橙'PSY的N末端存在转运肽信号序列,成熟的PSY包含1个跨膜结构域.原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY,Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为52 kD.[结论]该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础.