柑橘类病毒的分子鉴定与分型

摘要

[目的]检测湖南地区柑橘所携带的柑橘类病毒类型,并鉴定柑橘类病毒的亚型.[方法]以田间柑橘枝条韧皮部为试材,提取总RNA,反转录成cDNA,再用不同类型类病毒的特异引物进行PCR扩增,鉴定出各个样品所携带的柑橘类病毒类型;通过测序分析各类型的序列,并与国内外报道的序列进行同源性分析,确定所测样品的亚型.[结果]建立了CEVd、CVdⅡ、CVdⅢ等柑橘类病毒的RT-PCR检测方法.在5个供试样品中检测出3种类型的柑橘类病毒,即柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd),柑橘类病毒Ⅱ型(citrus viriod Ⅱ,CVdⅡ,又名hop stunt viroid,HSVd)和柑橘类病毒Ⅲ型(citrus viriodⅢ,CVdⅢ),其中CVdⅡ和CVdⅢ为国内首次发现.亚型分析表明CVdⅡ可能为新的亚型;CVdⅢ为b亚型,可能具有矮化功能.[结论]在中国鉴定出3种类型的柑橘类病毒,CEVd与国内已报道的序列完全一致,其中CVd Ⅱ和CVdⅢ为首次在中国发现;9检测到的CVdⅡ可能为新的亚型.