大肠杆菌中重组尖吻蝮蛇类凝血酶的纯化及鉴定

摘要

尖吻蝮蛇类凝血酶直接裂解纤维蛋白原且不激活凝血因子表现出良好抗凝效应,是重要的血栓类药物.大肠杆葛中高效表达重组尖吻蝮蛇类凝血酶,通过阴离子层析(DEAE650M,0.02M PBS+0.2M NaCl洗脱)和亲和层析(镍柱,0.02M PBS+0.5M NaCl溶液+20mM咪唑溶液洗脱),获得较纯样品.利用肠激酶酶切、纤维蛋白凝结活性、免疫印迹方式鉴定纯化样品为活性目的蛋白.此结果为商品化生产、应用类凝血酶提供思路及方向.