高通量测序解析驴骨胶原蛋白促进伤口愈合的潜在分子机制

摘要

探讨驴骨胶原蛋白对成纤维细胞(NHDFs细胞)增殖、迁移和Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响以及可能的作用通路。通过八肽胆囊收缩素(CCK-8)法、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法和划痕实验,研究驴骨胶蛋白对成纤维细胞增殖和迁移的影响,并利用转录组测序技术(RNA-seq)分析驴骨胶原蛋白作用于成纤维细胞的差异表达基因。结果表明,驴骨胶原蛋白对NHDFs细胞无毒性,且在0.16~5.0 g/mL内对NHDFs细胞有一定的促生长作用。0.75~1.50 g/mL的驴骨胶原蛋白能够促进NHDFs细胞增殖,且驴骨胶原蛋白对NHDFs细胞增殖的影响呈现剂量依赖关系。1.50 g/mL的驴骨胶原蛋白可显著促进NHDFs细胞迁移和Ⅰ胶原蛋白的分泌。驴骨胶原蛋白作用于成纤维细胞后,共筛选出384个差异表达基因,其中172个基因上调,212个基因下调。GO功能富集分析结果表明,差异表达基因与中性粒细胞趋化性、中性粒细胞迁移、粒细胞趋化性等有关;KEGG通路富集分析表明,差异基因参与细胞因子-细胞因子受体相互作用、化学致癌、IL-17和TNF等重要生物学通路。推测,驴骨胶原蛋白可能通过IL-17和TNF-α介导CXCL趋化因子发挥促进皮肤伤口愈合的作用。本文明确了驴骨胶原蛋白促进伤口愈合的效果,填补驴骨胶原蛋白促进伤口愈合的研究空白,为驴骨胶原蛋白高值转化提供了思路。