槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

摘要

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 mg·L-1 TGF-β1+25μmol·L-1槲皮素组、10.0 mg·L-1 TGF-β1+50μmol·L-1槲皮素组,ARPE-19细胞在4种不同的条件下培养24 h和48 h.采用CCK-8法测定各组细胞活性,Transwell实验检测细胞迁移情况,ELISA检测细胞中I型胶原蛋白含量,Western blot检测各组细胞上皮-间质转化标志物表达情况及Smad2/3磷酸化情况.结果 处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L-1 TGF-β1组细胞存活率均高于其他各组(均为P<0.05);10.0 mg·L-1 TGF-β1+25μmol·L-1槲皮素组细胞存活率高于10.0 mg·L-1 TGF-β1+50μmol·L-1槲皮素组(P<0.05).处理细胞24 h或48 h,10.0 mg·L-1 TGF-β1组细胞迁移数均多于其他各组(均为P<0.05);10.0 mg·L-1 TGF-β1+25μmol·L-1槲皮素组细胞迁移数多于10.0 mg·L-1 TGF-β1+50μmol·L-1槲皮素组(P<0.05).10 mg·L-1 TGF-β1处理细胞48 h后,培养基上清液I型胶原蛋白含量升高(P<0.05),而加入不同浓度槲皮素均能够有效抑制I型胶原蛋白含量的升高(均为P<0.05).槲皮素以浓度依赖的方式显著降低了TGF-β1所引起的N-钙黏合素和α平滑肌肌动蛋白的表达增高作用;槲皮素可以使紧密连接蛋白ZO-1和E-钙黏合素的表达增高.10 mg·L-1 TGF-β1处理细胞48 h后,Smad2/3磷酸化显著增加,而槲皮素可以抑制Smad2/3磷酸化.结论 槲皮素能够显著抑制TGF-β1介导的RPE细胞增殖、迁移和胶原分泌,通过调节Smad2/3磷酸化来抑制TGF-β1介导的RPE细胞的上皮-间质转化过程.