miR-140-5 p靶向Nrf2对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化应激的调节作用

摘要

目的 探讨miR-140-5p靶向核因子-类胡萝卜素2相关因子2(nuclear factor ery-throid 2-related factor 2,Nrf2)对高糖诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞氧化应激的调节作用及对应的分子生物学机制.方法 使用5 mmol·L-1、10 mmol·L-1、20 mmol·L-1、30 mmol·L-1、50 mmol·L-1的葡萄糖分别处理ARPE-19细胞.利用CCK-8法及RT-qPCR检测各葡萄糖浓度下ARPE-19细胞的活力及miR-140-5p、Nrf2 mRNA表达情况.将miR-140-5p inhibitor、miR-140-5p-NC、miR-140-5p-mimic、si-Con或si-Nrf2转染入ARPE-19细胞,根据转染物和葡萄糖浓度不同分组,使用DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内活性氧(re-active oxygen species,ROS)水平,使用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性试剂盒检测SOD活性;使用RT-qPCR检测不同处理的ARPE-19细胞Nrf2 mRNA表达情况,并通过荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证.结果 与葡萄糖浓度为5 mmol·L-1时相比,30 mmol·L-1、50 mmol·L-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞存活率显著降低(P<0.05、P<0.001),而miR-140-5p相对表达量则明显升高(P<0.05、P<0.001).与50 mmol·L-1葡萄糖+miR-140-5p-NC处理组相比,50 mmol·L-1葡萄糖+miR-140-5p inhibitor处理组细胞存活率显著增加,ROS含量显著降低,SOD活性显著增加(均为P<0.01).与葡萄糖浓度为5 mmol·L-1时相比,30 mmol·L-1、50 mmol·L-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞Nrf2 mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01、P<0.001).荧光素酶报告基因实验结果显示,与转染miR-140-5p-NC组相比,转染miR-140-5p-mimic组Nrf2相对荧光素酶活性显著降低,转染miR-140-5p-in-hibitor组Nrf2相对荧光素酶活性显著增多,差异均有统计学意义(均为P<0.001).在50 mmol·L-1葡萄糖浓度下,与转染miR-140-5p-inhibitor+si-Con的ARPE-19细胞比较,转染miR-140-5p inhibitor+si-Nrf2后ARPE-19细胞存活率降低,细胞内ROS含量增高,SOD活性下降(均为P<0.01).结论 miR-140-5p可能通过靶向Nrf2调节高糖诱导的RPE细胞氧化应激作用.