玻璃体内注射双调蛋白抗体对透镜诱导型近视豚鼠屈光度、眼轴长度及视网膜中双调蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨双调蛋白(amphiregulin,AREG)对透镜诱导型近视豚鼠屈光度、眼轴长度以及视网膜中AREG蛋白和mRNA表达的影响.方法 选取2周龄健康英国三色短毛豚鼠30只,随机分为正常对照组、近视组、AREG低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各6只.除正常对照组外,其余组均右眼配戴-10.0 D透镜,左眼作为自身对照与正常对照组均不做任何处理,戴镜2周后分别测量各组的屈光度及眼轴长度.第3周开始,近视组豚鼠右眼玻璃体内注射Linger注射液3μL,低剂量组、中剂量组、高剂量组豚鼠右眼分别注射500mg·L-AREG抗体(R&D:MAB989-500)1 μL、2μL、3μL,对侧眼作为自身对照,不做任何处理,每周注射1次,连续注射3周,期间继续配戴眼镜,3周后分别测量各组豚鼠的屈光度和眼轴长度.采用免疫荧光标记法检测豚鼠视网膜AREG蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测豚鼠视网膜AREG mRNA的表达.结果 入组前各组豚鼠的初始屈光度及眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与正常对照组相比,透镜诱导2周后近视组、低剂量组、中剂量组、高剂量组豚鼠右眼屈光度下降,眼轴延长(均为P ＜0.05);各组左眼屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).玻璃体内注射AREG抗体3次后,与近视组相比,低剂量组屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05);中剂量组屈光度差异无统计学意义(P＞0.05),但眼轴缩短,差异有统计学意义(P＜0.01);高剂量组屈光度上升且眼轴缩短,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);各组对侧眼的屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).免疫荧光标记法在各组豚鼠眼球后极部、赤道部以及后极部与赤道部之间的视网膜均检测到AREG蛋白,说明AREG主要分布在眼球视网膜组织,且无部位特异性.AREG蛋白在近视组豚鼠视网膜高表达,正常对照组低表达,玻璃体内注射AREG抗体后低剂量组、中剂量组和高剂量组AREG蛋白表达逐渐下降.将正常对照组视网膜AREG mRNA表达量标准化为100％,近视组、低剂量组、中剂量组、高剂量组右眼AREG mRNA表达量分别与标准化后的正常对照组比较得到目的基因的相对表达量.近视组AREGmRNA相对表达量最高,正常对照组其次,低剂量组、中剂量组和高剂量组AREG mRNA的表达呈剂量依赖性下降.结论 玻璃体内注射AREG抗体后,豚鼠眼轴缩短,屈光度增加,视网膜中AREG蛋白和mRNA呈剂量依赖性表达下降.AREG在近视发生发展过程中起重要作用.