前脑特异性CCKR-2双转基因小鼠的繁育及基因鉴定

摘要

目的:繁殖及鉴定可调控前脑特异性胆囊收缩素受体2 (Cholecystokinin receptor-2,CCKR-2)双转基因小鼠(tTA/tetO-CCKR-2 double transgenic,简称dtg),为进一步研究CCKR-2在焦虑相关疾病,如焦虑症、恐惧行为、创伤后应激障碍等发病过程中的作用及分子机制提供实验模型.方法:(1)利用α-CaMKII/tTA单转基因小鼠与tetO/CCKR-2单转基因小鼠杂交,所得子代尽可能远亲繁殖获得dtg小鼠,提取子代鼠尾基因组DNA,采用PCR法及琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物以确定其基因型;(2)采用原位杂交方法验证CCKR-2双转基因前脑特异性表达,筛选CCKR-2双转基因型及前脑特异性表达者作为继代种鼠和实验用鼠.结果:(1)PCR凝胶电泳图显示清晰的tTA(350 bp)和CCKR-2(550 bp)条带,野生型无条带显示,表明琼脂糖凝胶电泳结果与dtg模型预期基因片段大小相符;(2)原位杂交结果显示dtg小鼠前脑区域有强烈的CCKR-2表达而野生型小鼠不明显.此结果表明dtg双转基因小鼠在本实验室的成功建立与繁殖及继代,同时繁殖出更多的dtg小鼠.结论:通过正确的饲养繁育和基因鉴定方法能成功获得dtg双转基因小鼠,为本实验室进行后续相关研究奠定了基础.