TGF-β1通过RUNX2调控人肝星状细胞系LX-2中骨桥蛋白表达

摘要

目的:探讨人肝星状细胞系LX-2中促纤维化因子TGF-β1对骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的转录调控作用,研究其潜在关系及作用通路.方法:经重组因子TGF-β1刺激后,western blot检测人肝星状细胞系LX-2中OPN和RUNX2的表达水平.通过生物信息学分析软件预测RUNX2在OPN启动子序列上的结合位点.构建基于pGL3-Basic的人OPN启动子载体和相应截短体,与RUNX2共转染HEK293细胞,结合双荧光素酶报告基因实验分析RUNX2对OPN启动子的转录调控作用.结果:经TGF-β1刺激后,LX-2细胞系中OPN与RUNX2的蛋白表达水平均升高,提示二者均为TGF-β1下游效应分子.TESS生物信息学分析显示OPN启动子序列-78～-73存在RUNX2的结合位点ACCACA.通过双荧光素酶报告基因实验结果显示:RUNX2对OPN启动子具有正向调控作用,且通过截短删除之前预测的结合位点后,该调控作用消失.结论:TGF-β1可促进人肝星状细胞系中OPN的表达,该作用部分通过其下游转录因子RUNX2作用于OPN启动子区域的ACCACA序列而实现.