一种动态检测小鼠微量血中T细胞受体重排删除环含量的方法

摘要

目的:通过检测比较外周血(颈动脉大量采血和微量隐静脉采血)、胸腺组织和脾脏组织等不同成分或组织中T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并建立一种通过微量外周血PCR预扩增的方法,评估胸腺输出功能.方法:采用C57BL/6小鼠作为实验对象,分成幼年组(5周龄,n=10)和成年组(15周龄,n=10).经过隐静脉采血及颈动脉采血后处死小鼠,取小鼠胸腺器官和脾脏器官,提取基因组DNA(gDNA),隐静脉微量血gDNA通过PCR预扩增,提纯后再和颈动脉血、胸腺组织和脾脏组织gDNA一起进行实时定量PCR,分析各组织成分TREC的表达水平及差别.结果:幼年组胸腺组织及外周血中TREC的含量比成年组高,且二者趋势基本一致;而脾脏组织结果与其相反;幼年组小鼠胸腺组织中TREC的含量比脾脏组织中高,成年组小鼠结果与之相反;微量外周血经过预扩增后再进行实时定量PCR的结果与直接定量PCR结果一致,且更高效.结论:研究提供了一种新型高效的动态检测T细胞受体重排删除环和检测胸腺输出功能的方法.