应用原位双膜法快速筛选人Flt3配体甲醇酵母高表达转化子

摘要

原位双膜法是一种基于免疫原理的快速筛选高表达甲醇酵母转化子的方法,即首先将固体培养基上的菌落转印至醋酸纤维素薄膜上,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获穿过醋酸纤维素薄膜的菌落外泌蛋白,然后用免疫方法检测与硝酸纤维素薄膜结合的蛋白.利用此法筛选到人Flt3配体(hFL)的甲醇酵母高表达转化子,液体诱导表达量约20 mg/L.ELISA结果证明,原位双膜法所得的菌落染色强度与该菌落液体诱导表达水平正相关.蛋白质印迹结果显示,培养上清在25 ku处有明显杂交条带,而对照组杂交呈阴性,且表达量随诱导天数增加.原位双膜法是一种良好的筛选方法,可以快捷、准确地筛选高表达酵母转化子.