人类红细胞膜带3蛋白C端域Lys892～Phe895在Cl-转运过程中作用的研究

摘要

采用酵母表面展示系统,表达带3蛋白膜段结构域(Gln404～Val911)至酵母细胞膜,功能研究表明,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性,同时,带3蛋白抑制剂4,4′-二异硫氰-2,2′-二黄酸芪(DIDS)能够抑制其离子转运的功能.利用PCR方法,以pFAST-Bac-mdb3为模板扩增出带3蛋白膜段结构域的4种截断突变体,分别去除带3蛋白C端域后4个(Ala908～Val911)、16个(Asp896～Val911)、20个(Lys892～Val911)、32个(Asn880～Val911)氨基酸序列,测序后将其克隆至表达载体pYD1上,构建酵母表达质粒pYD1-Trunc4、pYD1-Trunc16、pYD1-Trunc20和pYD1-Trunc32,诱导4组突变体的蛋白质表达.然后测定Cl-的转运活性,结果发现去除后20个(Lys892～Val911)氨基酸残基后,离子转运活性明显下降,而去除后32个(Asn880～Val911)后,离子转运没有进一步下降,说明Lys892～Phe895 4个氨基酸残基在带3蛋白的离子转运过程中发挥重要作用.