突托蜡梅ISSR引物反应条件的优化与筛选

摘要

为从突托蜡梅(Chimonanthus grammatus)叶片中提取高质量的总DNA,比较了CTAB法、改良的CTAB法、SDS法、高盐低pH值法、SDS-CTAB法、SDS-蛋白酶K法。结果表明:改良的CTAB是提取突托蜡梅基因组DNA的有效方法。以U811(GA)8C为引物,确立了适合突托蜡梅的ISSR反应体系:在20μL反应体系(50 ng DNA、0.6μmol/L引物、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTPs、2.0 UTaqDNA聚合酶)中,反应程序为:94℃预变性5 min、94℃变性1 min、57.2℃退火45 s、72℃延伸2 min,循环40次,最后于72℃延伸5 min。用来自不同居群的7个个体,以100个ISSR引物进行PCR扩增,筛选出了扩增效果较好的10个引物,得到了74个位点,其中39个为多态位点,多态性位点比例为52.7%。