CHO细胞转染策略的分析及优化方法的建立

摘要

按嵌套设计进行细胞电敏感性实验,通过嵌套设计的方差分析了解电穿孔转染缓冲液的pH值、电场强度及电容与活细胞数量的关系。根据嵌套设计结果安排L9(34)正交设计,以最接近50%存活率为期望指标,同时分析主因素间的交互作用并确定最优转染方案。CHO-dhfr-细胞电穿孔转染的优化参数为pH 7.2的低离子强度Tris-Cl缓冲液,525 V/cm、75μF电击2次,间隔1 min。该方法不但确定了电穿孔转染CHO-dhfr-细胞的条件,而且适用于其它种类细胞的电穿孔转染条件的快速优化。