基于HCV J6-JFH/Huh7.5.1抗HCV活性药物筛选体系的构建与验证

摘要

以J6-JFH/Huh7.5.1 HCV体外培养体系为基础,建立抗HCV体外药物筛选体系,并用环孢素A(Cs A)验证该体系的工作性能。用重组HCV(J6-JFH)感染Huh-7.5.1细胞,根据病毒增殖特征确定最适病毒感染复数;MTT法测定细胞毒性,得出CC50值;Real-time RT-PCR法测定HCV病毒载量,得出EC50值,计算药物的选择指数(SI),建立抗HCV药物筛选技术体系;用环孢素A验证该体系的工作性能。最适病毒感染复数为1;利巴韦林CC50=21.15μg/m L、EC50=2.256μg/m L和选择指数SI=9.375;干扰素EC50=0.194 IU/m L,用本技术体系测定Cs A的EC50值为(0.046±0.9)%。利巴韦林可作为合适的阳性药物对该技术体系进行质量控制;干扰素有稳定的抗病毒活性,但无细胞毒性,只能进行药物抗病毒活性质控。检测的Cs A的EC50值与已有的报道数据相似,并且Cs A抗HCV活性不受血清浓度的影响。结果证明,在2a型J6-JFH1/Huh7.5.1 HCV细胞培养体系基础上,成功建立了抗HCV药物筛选体系,该技术体系可行并稳定,为抗HCV药物筛选提供了良好的技术平台。