丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶在大肠杆菌中可溶性表达条件的优化

摘要

为了提高丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(HCV-RdRp)在大肠杆菌中的可溶性表达,对影响蛋白可溶性表达水平的多种因素进行了优化。探讨了诱导时机、诱导温度及时间、诱导剂IPTG浓度等对重组蛋白可溶性表达的影响,筛选出了提高可溶表达该蛋白的最适条件。结果表明,在菌体密度OD600约为1.6时,加入终浓度为0.20 mmol/L的诱导剂IPTG,25℃下诱导表达16 h,可以获得最多的可溶性表达蛋白,获得了纯化较好并有特异性的HCV-RdRp重组蛋白,为建立其体外活性测定方法及抑制剂的筛选奠定了基础。