体外细胞培养中甲肝病毒的连续传代及激光扫描共聚焦成像

摘要

观察甲肝病毒(HAV)在体外细胞培养中连续传代的特点及细胞内病毒荧光的激光扫描共聚焦成像。实验中采用了间接免疫荧光法(IF)与激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)结合技术,并与ELISA进行比较。LSCM技术发现将NJ-3株HAV接种于PLC/PRF/5细胞1 h后细胞表面有病毒吸附,2-4 h病毒吸附量增多,4 h后逐步减少。在病毒随细胞连续传代中,至第7代病毒增殖量可达到稳定状态并至少可连续传77代,感染病毒的细胞可达95％以上;细胞传代或病毒收获的最佳周期为5 d;经多次冻存、复苏,仍保持良好的细胞形态和产毒性能。结果表明LSCM技术能更早地检出细胞表面吸附的少量病毒和胞浆内微弱的HAAg荧光,而ELISA则需要较多量病毒才能显示阳性。提示前者更适合于少量病毒时的定性,特别是在初次病毒分离时;后者则适合于病毒量较多时的整体定量。