正交实验设计优化白木香ISSR-PCR反应体系的研究

摘要

利用正交实验设计的方法,对白木香ISSR-PCR(简单重复序列区间-多聚酶链式反应)反应体系中的5种主要因素(dNTP、Mg2+、模板DNA、引物和Taq酶)在4个水平上进行优化筛选,建立了白木香ISSR-PCR反应的最佳体系(25μl)为:dNTP 0.2 mmo1/L、Mg2+2.5 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 100 ng和Taq酶1.0 U。通过梯度PCR反应得到相应引物的最佳退火温度为49.2℃。这一体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究白木香的遗传多样性提供了标准化程序。