甜瓜ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

摘要

为找到甜瓜ISSR-PCR反应4个主要因素的最优水平,确定甜瓜ISSR-PCR最优反应体系。通过采用CTAB法提取甜瓜基因组DNA,获得完整性好且纯度较高的DNA样品。利用统计软件MINTAB创建4因素3水平的正交试验设计,PCR结果用MINITAB进行方差分析。结果显示引物浓度对PCR反应结果影响最大,Taq DNA聚合酶对PCR结果影响最小,并对各因素水平间进行因素内多重比较分析,最终建立最优化的反应体系(20μL):1×buffer,100ng DNA模板,TaqDNA聚合酶1U,引物0.4μmol/L,dNTP为0.1mmol/L。