在大肠杆菌中分泌表达水蛭素基因的初步研究

摘要

为实现水蛭素 (HV3)基因的分泌表达 ,设计合成了两对 (四条 )寡核苷酸链 ,退火、拼连成 L-门冬酰胺酶信号肽简并基因 ,同时利用密码子的简并性在该基因 3′端基因内引入了一个Nhe I限制酶切位点。此外 ,用 PCR技术在 HV3基因 5′端引入 Nhe I限制酶切位点 ,利用该酶切位点将信号肽基因与 HV3基因进行连接且保持原有阅读框架不变 ,构建了重组质粒 p UCSH,测序结果表明 ,融合基因核苷酸序列与设计要求完全一致 ,将该融合基因插入 p KK2 33- 2中构建成HV3分泌表达质粒 p KSH,该质粒在大肠杆菌中表达后 ,表达产物分泌至细胞膜间质中 ,膜间质蛋白抽提液抗凝血酶生物活性为 1 0～ 1 4 ATU/