Rab25沉默对转化生长因子-β诱导的前列腺癌LNCaP细胞上皮-间充质转化的影响

摘要

目的探讨Rab25沉默对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的前列腺癌LNCaP细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法设计针对Rab25基因的3个干扰靶点(shRab25-1、shRab25-2、shRab25-3),将目的基因片段克隆到慢病毒载体中,连接产物转化到前列腺癌LNCaP细胞后提取重组质粒,分别作为shRab25-1组、shRab25-2组、shRab25-3组,并设置空白对照NC组。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测Rab25 mRNA和蛋白相对表达量,筛选高干扰效率靶序列。培养NC组和shRab25-1组细胞,加入TGF-β(5 ng/ml)或不加入TGF-β,分别作为NC组、NC+TGF-β组、shRab25-1组、shRab25-1+TGF-β组,使用相差显微镜观察各组LNCaP细胞的形态学变化,采用Western blot检测各组LNCaP细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达情况。结果测序结果显示成功构建了Rab25的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体。qRT-PCR和Western blot检测结果显示,Rab25沉默后shRab25-1组细胞中Rab25表达量最低。相差显微镜显示Rab25沉默后细胞密度降低,加入TGF-β会部分逆转这种抑制作用,同时各组细胞形态结构未见明显破坏。shRab25-1组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量高于NC组,N-cadherin蛋白相对表达量低于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);NC+TGF-β组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量低于NC组,N-cadherin蛋白相对表达量高于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);shRab25-1+TGF-β组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量低于shRab25-1组,N-cadherin蛋白相对表达量低于NC+TGF-β组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论Rab25沉默可逆转TGF-β介导的前列腺癌LNCaP细胞的EMT。