重组质粒HF443-EGFP的构建及其在赤潮毒素检测中的应用初探

摘要

采用基因工程的方法,进行重组质粒HF443-EGFP的构建和在哺乳动物细胞中的表达,并进行了其用于赤潮毒素检测的可能性研究.结果表明,用PCR技术扩增EGFP基因,用Xba Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切并纯化,与同样双酶切并纯化的HF443质粒连接,可构建重组质粒HF443-EGFP;利用Lipofect AMINE 2000转染体外培养哺乳动物BIU-87细胞.在培养体系中加入不同浓度的GTX,而后加入Na+通道激活剂乌头碱以诱导绿色荧光蛋白表达,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白表达的变化情况.细胞发出的荧光随毒素浓度的增加而减弱,存在一定的剂量效应关系,提示毒素GTX可显著影响绿色荧光蛋白的表达,重组质粒HF443-EGFP用于赤潮毒素检测有一定的可行性.