鸡补体因子C3d对禽流感病毒M2蛋白免疫应答反应的增强作用

摘要

M2蛋白是禽流感病毒中具有交叉保护性的结构蛋白,但其抗原性差,难以诱导高水平的免疫反应.分别将一个鸡补体因子C3d,2个C3d基因同禽流感sM2基因(缺失跨膜区的M2基因)以柔性肽链Linker串联连接,构建了4个重组质粒并在大肠杆菌中表达出4种带有谷胱苷肽硫转移酶(GST)的融合蛋白:GST-C3d-sM2,GST-C3d-L2-sM2,GST-C3d-L1-C3d-sM2,GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2.将纯化后的4个融合蛋白及对照GST-sM2蛋白免疫BALB/c鼠4次(每组10只),结果在三免后,4个融合蛋白免疫的BALB/c鼠体内抗sM2抗体滴度与对照组相比均差异显著(p＜0.05),并且GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2组的抗体滴度最高.另外,分别构建重组质粒pcDNA-sM2和pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2,然后以这两种DNA疫苗与蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和GST-sM2同时接种14日龄SPF鸡3次(每组15只).结果表明,蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和对照组GST-sM2的抗sM2抗体滴度差异明显(p＜0.01),而pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2平均sM2抗体滴度也明显高于对照组pcDNA-sM2(p＜0.05).分别以脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(ConA)作为致裂原对SPF鸡的外周血淋巴细胞进行淋巴细胞转化试验(MTT法).结果以LPS刺激的淋巴细胞的增殖程度在融合蛋白GST-C3d1-L1-C3d2-L2-sM2免疫组与对照组GST-sM2之间以及pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2免疫组与对照组pcDNA-sM2之间均差异极显著(p＜0.01),而Con A刺激的淋巴细胞各组之间则无显著差异.所有这些结果证实,鸡补体因子C3d无论是在原核系统表达的融合蛋白,还是插入DNA疫苗中均可以增强禽流感病毒M2蛋白引起的免疫应答反应.