青少年特发性脊柱侧凸脊柱关节突骨组织差异基因表达的研究

摘要

目的构建青少年特发性脊柱侧凸脊柱小关节突骨组织抑制消减 cDNA 文库,以研究特发性脊柱侧凸的基因表达变化。方法取特发性脊柱侧凸患者顶椎凸凹侧下关节突骨组织提取mRNA,经反转录后,利用抑制消减杂交（SSH）方法,通过两轮杂交和两次抑制 PCR 构建了两种组织间差异表达基因的 cDNA 消减文库。筛选差异表达基因并测序,将结果与核酸数据库进行同源性比较。并进一步收集11例特发性脊柱侧凸患者的顶椎和上下端椎凸凹侧下关节突,采用免疫组织化学方法和原位杂交方法对发现的差异表达基因进行验证,将所得的免疫组化和原位杂交图像输入图像分析系统,进行半定量分析。结果对600个克隆测序结果初步分析,并从蛋白水平和基因水平进行检验,获得2个表达差异明显的基因:微球蛋白基因（β 2M）和钙结合蛋白基因（calgranulin A,S100A8）。结论应用消减杂交的方法,经适当地改进,在去除相同遗传背景的条件下,可以建立较特异的特发性脊柱侧凸脊柱小关节突骨组织 cDNA 消减文库,该文库可进一步批量筛选与特发性脊柱侧凸的发生和发展相关的基因群,并克隆特发性脊柱侧凸相关表达基因,研究其与特发性脊柱侧凸发生的分子机理与生物学特性间的关系。差异表达的基因可能与青少年脊柱侧凸呈密切相关。