谷氨酰胺下调大鼠肝细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

摘要

目的利用原代培养的大鼠肝细胞,观察谷氨酰胺（Gln）在体外对白细胞介素-1μ（IL-1β）刺激下一氧化氮合酶（iNOS）过度表达的影响。方法原位胶原酶灌注法获取原代大鼠肝细胞,分别用生理盐水、IL-1β（1nmol/L）以及IL-1β（1nmol/L）联合不同浓度的Gin（2、5、10 mmol/L）刺激24h,留取细胞和培养液,采用生化法测定培养液一氧化氮（NO）的水平,采用实时定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法及蛋白质印迹法检测肝细胞内iNOS信使RNA和蛋白质水平,采用电泳迁移率转变试验检测肝细胞核内核因子κB（NF-κB）的活性。结果IL-1β刺激后培养液NO的平均浓度为72.7μmol/L明显高于生理盐水组41.7μmol/L,肝细胞iNOS蛋白和mRNA水平分别增加了35%和90%,同时给予Gln能够抑制iNOS的过度活化减少NO的产生,并且这种抑制作用随着Gln浓度的增加而增强;IL-1β刺激后肝细胞核内NF-κB的结合活性增强约50%,Gln对NF-κB的活化没有抑制作用,在5、10 mmol/L浓度时反而对NF-κB有进一步的激活。结论谷氨酰胺能够下调肝细胞在炎症应激诱导下iNOS基因的过度表达,减少NO的产生,这一作用不是通过NF-κB信号通路实现的。