游离脂肪酸对滋养细胞线粒体脂肪酸氧化功能的影响及其与p38MAPK信号通路的相关性

摘要

目的探讨不同链长游离脂肪酸对胎盘滋养细胞中线粒体长链脂肪酸氧化功能影响及其与p38MAPK信号通路的相关性。方法分别以无游离脂肪酸和短、中、长、极长链脂肪酸孵育胎盘滋养细胞（F-FFA、SC-FFA、MC-FFA、LC-FFA、VLC-FFA组）。再分别以DMEM/F12培养基、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPH）抑制剂和p38MAPK抑制剂孵育细胞。采用荧光实时定量PCR（Realtime PCR）和蛋白印迹法（Western blot）检测各组LCHAD基因和蛋白表达变化。结果（1）LCHAD的mRNA表达变化:F-FFA+DMED、SC-FFA+DMEM、MC-FFA+DMEM、LC-FFA+DMEM、LC-FFA+NADPH-I、LC-FFA+p38MAPK-I、VLC-FFA+DMEM、VLC-FFA+NADPH-I、VLC-FFA+p38MAPK-I组LCHAD mRNA的△ct值为4.57±0.12、4.36±0.09、4.55±0.10、6.84±0.42、4.45±0.24、5.08±0.36、2.23±0.15、3.90±0.32、3.81±0.40。与F-FFA各组相比较,LC-FFA+DMEM/p38MAPK-I组LCHADmRNA相对表达量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而VLC各组均有明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LC-FFA+DMEM组相比较,LC-FFA+NADPH-I/p38MAPK-I组LCHADmRNA相对表达量明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与VLC-FFA+DMEM组相比较,VLC-FFA+NADPH-I/p38MAPK-I组中LCHADmRNA相对表达量明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）LCHAD蛋白表达变化:F-FFA+DMED、SC-FFA+DMEM、MC-FFA+DMEM、LC-FFA+DMEM、LC-FFA+NADPH-I、LC-FFA+p38MAPK-I、VLC-FFA+DMEM、VLC-FFA+NADPH-I、VLC-FFA+p38MAPK-I组LCHAD/β-肌动蛋白比率分别为23.6±13.0、21.2±10.2、19.7±1.9、10.6±2.6、14.0±1.8、14.0±2.8、29.3±1.9、35.8±3.2、35.2±4.5。与F-FFA各组比较,LCFFA组LCHAD蛋白相对表达量降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,VLC-FFA+NADPH-I/p38MAPK-I组LCHAD蛋白相对表达量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论游离脂肪酸影响人滋养细胞线粒体脂肪酸β氧化循环LCHAD的基因蛋白表达变化;长链脂肪酸刺激下的胎盘滋养细胞中存在脂肪酸β-氧化代谢障碍,NADPH、p38MAPK抑制剂能够缓解脂肪酸氧化代谢障碍,提示p38MAPK信号通路可能参与了该过程;极长链脂肪酸与脂肪酸β-氧化代谢存在有一定的相关性,其相互作用机制还有待进一步研究。