去乙酰化酶抑制剂筛选靶向慢性髓系白血病癌基因Bcr-Abl的微小RNA

摘要

目的使用去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）筛选靶向作用于慢性髓系白血病癌基因Bcr-Abl的微小RNA（microRNA）。方法通过MTS法检测SAHA对慢性髓系白血病K562细胞增殖活力的影响, 确定合适的SAHA作用浓度;Western印迹检测多聚ADP核糖聚合酶（PARP）蛋白水平, 明确SAHA是否诱导K562细胞发生凋亡;荧光定量PCR检测SAHA对K562细胞Bcr-Abl基因转录水平的影响;通过在线预测软件（Target Scan）和实时荧光定量PCR筛选靶向作用Bcr-Abl的microRNA, 并将筛选到的microRNA转染K562细胞, 通过MTS法和定量PCR检测转染后K562细胞的细胞活力和Bcr-Abl的mRNA水平。结果 SAHA显著抑制K562细胞增殖并诱导细胞发生凋亡, 同时SAHA显著下调Bcr-Abl基因转录水平;SAHA处理K562细胞后, 使用Target Scan和定量PCR筛选到可能靶向Bcr-Abl的两个microRNA[microRNA-192（miR-192）和miR-6816], SAHA能诱导它们显著上调, 分别上调14.5和5.2倍;向K562细胞转染筛选到的miR-192和miR-6816能够显著抑制K562细胞活力和下调Bcr-Abl基因的mRNA水平。结论去乙酰化酶抑制剂SAHA促使K562细胞miR-192和miR-6816的上调, miR-192和miR-6816进一步下调Bcr-Abl基因的mRNA水平, 进而抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡。