苇状羊茅内生真菌与多年生黑麦草内生真菌实时荧光PCR检测研究

摘要

苇状羊茅内生真菌Neotyphodium coenophialum和多年生黑麦草内生真菌N.lolii对美国、新西兰等国家的畜牧业曾经造成过巨大损失.以N.coenophialum和N.lolii及其近似种N.huerfanum、N.chisosum、N.aotearoae、N.sp.共6种18个菌株,以及苇状羊茅和多年生黑麦草8个品种种子为供试材料,根据Tub-2基因设计了通用Taqman探针及引物,根据NC25基因设计了N.coenophialum和N.lolii的特异Taqman探针及共用引物,通过通用探针的单色荧光PCR和特异探针的双色荧光PCR,建立了N.coenophialum和N.lolii的菌丝及单粒种子稳定可靠、特异性强的荧光PCR检测方法,检测灵敏度达到单粒种子,使检测时间由至少一个月缩短至7～8个小时.