从双向电泳到生物质谱——蛋白质组分析技术的最新进展

摘要

@@蛋白质组研究是对细胞和组织以及生物液体中的蛋白质进行大规模的筛选和识别。在整个蛋白质分离和识别过程中，样品制备、双向电泳、图像扫描分析、蛋白斑点切取、质谱分析和数据库检索，每一个步骤都需要严格的操作，而双向电泳是蛋白质组分析的核心技术，到目前为止，没有任何一个其它技术可以象双向电泳一样，一次可以分离几千个蛋白质。rn 双向电泳的最新进展是用固相pH梯度(IPG)干胶条代替两性电解质，加上与干胶条相配套的电泳仪如IPGphore进行第一相等电聚焦，这不仅极大地提高了电泳的分辨率，也提高了结果的重复性，尤其是不同实验室之间结果的可比性。固相pH梯度扩展了双向电泳的pH范围，在pH12左右仍然稳定，故碱性蛋白也能够得到分离，不会象以前由于两性电解质在阴极端的漂移而失去碱性蛋白。IPGphore利用经典的水平电泳技术，设有内置电源，能输出高达8000V的电压，使等电聚焦缩短至2～3小时，比传统所需时间快5倍左右。IPGphore在设计上尽量简化操作步骤，目的也是提高每次结果的重复性。IPGphore一次最多可走12条长度7～24cm的干胶条，配上同时可走12块第二向SDS PAGE胶的Teean Dalt垂直电泳系统，使得双向电泳的速度和规模大大增加。随着各种窄范围pH梯度(范围为1个pH)干胶条的推出和胶条长度的增加，大大增加了蛋白的分辨率和载量。蛋白载量和纯度增加后，双向电泳所分离的蛋白斑点可通过质谱和Edman氨基酸测序进行分析和鉴定。